Đánh giá độ lệch thời gian lưu theo 2002/657 / EC.
Hướng dẫn xác thực 2002/657 / EC của Ủy ban Châu Âu sử dụng khái niệm thời gian lưu tương đối ( RRT ) để thiết lập giới hạn dung sai của thời gian lưu. RRT được định nghĩa là tỷ số giữa thời gian lưu của chất phân tích ( RT ) với thời gian lưu của chất chuẩn nội (IS). Đối với ví dụ này, metformin có thể được coi là chất chuẩn nội về thời gian lưu. Dữ liệu thực nghiệm thu được từ dung dịch hiệu chuẩn cùng với giá trị RRT được trình bày trong Bảng 3. Giá trị trung bình của RRT thu được từ dung dịch hiệu chuẩn dùng làm giá trị tham chiếu cho chất phân tích.
Bảng 3. Thời gian lưu thực nghiệm tuyệt đối ( RT ) và tương đối thu được từ các dung dịch hiệu chuẩn ( RRT ) (Ví dụ: RRT=RT peak Dichlofenate/ RT peak nội chuẩn). Metformin được sử dụng làm chất chuẩn nội bộ (IS). Thời gian lưu tương đối trung bình của diclofenac và carbamazepine.
Metformin (IS) | Diclofenac | Carbamazepine | |||
| RT | RT | RRT | RT | RRT |
Cal 1 | 7.675 | 19.172 | 2.498 | 21.263 | 2.770 |
Cal 2 | 7.675 | 19.162 | 2.497 | 21.242 | 2.768 |
Cal 3 | 7.664 | 19.172 | 2.502 | 21.263 | 2.774 |
Cal 4 | 7.675 | 19.172 | 2.498 | 21.253 | 2.769 |
Cal 5 | 7.664 | 19.161 | 2.500 | 21.252 | 2.773 |
Cal 6 | 7.664 | 19.161 | 2.500 | 21.252 | 2.773 |
Cal 7 | 7.664 | 19.172 | 2.502 | 21.263 | 2.774 |
Trung bình ( RRT Ref ): | 2.499 | 2.772 | |||
Tương tự như dữ liệu hiệu chuẩn, giá trị RRT hiện được tính toán cho các pic của chất phân tích trong mẫu (Bảng 4). Để so sánh giá trị RRT trong mẫu với giá trị tham chiếu, sự khác biệt tương đối (dưới dạng phần trăm) được tính như sau:
(Phương án 1)
trong đó RRT là thời gian lưu tương đối của chất phân tích trong bơm mẫu và RRT Ref là giá trị trung bình của dung dịch hiệu chuẩn RRT -s.
Giá trị không ký hiệu của Rel.Diff được so sánh với giới hạn dung sai do 2002/657 / EC đặt ra: 2,5%. Kết quả đánh giá này cũng được trình bày trong Bảng 4.
Bảng 4. Thời gian lưu thực nghiệm tuyệt đối ( RT ) và tương đối ( RRT ) đối với tiêu chuẩn nội (IS) trong sắc ký đồ mẫu dịch chiết từ bùn thải. Sự khác biệt tương đối (tính theo phần trăm) của thời gian lưu tương đối so với các giá trị tham chiếu tương ứng được trình bày cùng với việc đánh giá kết quả đối với giới hạn dung sai 2002/657 / EC là 2,5%.
Metformin (IS) | Diclofenac | Carbamazepine | |||||||
| RT | RT | RRT | Rel. Khác biệt. | Tuân thủ? | RT | RRT | Rel. Khác biệt. | Tuân thủ? |
Mẫu 1 | 7,598 | 19.063 | 2.509 | 0,40% | Đúng | 21,23 | 2.794 | 0,80% | Đúng |
Mẫu 10 | 7,566 | 19.183 | 2,535 | 1,40% | Đúng | 21.285 | 2,813 | 1,50% | Đúng |
Mẫu 20 | 7,577 | 19.139 | 2,526 | 1,10% | Đúng | 21.263 | 2.806 | 1,20% | Đúng |
Mẫu 30 | 7,533 | 19.194 | 2,548 | 1,90% | Đúng | 21.296 | 2,827 | 2,00% | Đúng |
Mẫu 40 | 7,544 | 19.183 | 2,543 | 1,70% | Đúng | 21.285 | 2,821 | 1,80% | Đúng |
Mẫu 50 | 7,522 | 19.194 | 2,552 | 2,10% | Đúng | 21.285 | 2,83 | 2,10% | Đúng |
Mẫu 55 | 7.435 | 19.172 | 2,579 | 3,20% | Không | 21.274 | 2.861 | 3,20% | Không |
Theo dữ liệu Bảng 4, hầu hết tất cả thời gian lưu giữ đều tuân thủ. Chỉ có thời gian lưu của chất phân tích trong mẫu cuối cùng được phát hiện là không tuân thủ. Lý do là thời gian lưu của IS nhỏ hơn so với dự kiến.
So với các giới hạn dung sai do SANTE đặt ra, các giới hạn này của 2002/657 / EC có vẻ khoan dung hơn. Cần có tiêu chuẩn nội bộ để kiểm tra thời gian lưu theo năm 2002/657 / EC, điều này làm cho cách tiếp cận ít thoải mái hơn khi sử dụng.
Nguồn:
https://sisu.ut.ee/lcms_method_validation/27-identity-confirmation-examples
Đề xuât mẫu không nội chuẩn:±0,1 phút